鉴别猪瘟野毒与疫苗毒的单一与二重RT-PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第9期北京时间：

作者：马萍, 李达, 汤德元, 张元鑫, 张华, 曾智勇, 刘霞, 韦冠东

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 贵州省动物疫病预防控制中心, 贵阳 550008

摘要：为建立一种对猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）临床样本快速、简便的检测技术，以区分猪瘟（classical swine fever，CSF）野毒和疫苗毒感染，为规模化猪场CSF净化奠定基础。通过对GenBank中CSF野毒、疫苗毒及近源病毒的基因组全序列比对，发现CSF兔化弱毒疫苗株3’-NTR独立存在富含T的插入序列，根据这一特点分别在该插入序列的上、下两端设计2对单一RT-PCR引物并选择特异保守区域设计了二重RT-PCR引物，优化筛选能够鉴别CSF野毒与兔化弱毒疫苗的PCR反应条件，建立了能鉴别CSF野毒和疫苗毒的单一与二重RT-PCR鉴别诊断方法。敏感性和特异性分析表明，单一RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为2.2 pg（单一RT-PCR中的1对引物）和1.7 pg（单一RT-PCR中的另外1对引物）；二重RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为8.2 pg（CSF野毒）和6.7 pg（CSF疫苗毒），两种方法均检测不到PRV、PRRSV、JEV、BVDV、PCV2的DNA/RNA。采用该方法对146份可疑临床样品进行检测，结果表明CSF疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的二重感染率分别为6.3%、7.4%、8.3%、8.6%。本研究建立的单一与二重RT-PCR方法都具有敏感性强、特异性优、重复性好的特点，该研究对规模化猪场猪瘟的净化具有十分重要的参考价值。

关键词：猪瘟病毒;野毒;疫苗毒;单一RT-PCR;二重RT-PCR;鉴别诊断;净化应用

基金资助：贵州省2014年农业攻关项目（黔科合NY字[2014]3055号）；贵州省科学技术基金项目（黔科合J字[2013]2110号）；贵州大学研究生创新基金（农研[2015]030号）