4种抗原定量方法观察牛支原体培养特征

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第10期北京时间：

作者：王展慧, 赵萍, 陈胜利, 郝华芳, 秦明明, 王绍伟, 刘永生, 储岳峰

单位：中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部草食动物疫病重点开放实验室, 兰州 730046

摘要：为探索在疫苗研制过程中牛支原体抗原收获时间及抗原定量替代方法，将牛支原体08M株接种于含10%马血清的Thiaucourt's培养基，在110 h内同时监测其颜色变化单位（color change units，CCU）、菌落形成单位（colony forming units，CFU）、菌体蛋白浓度和核酸含量的变化，绘制相应曲线。活菌计数结果（CCU和CFU）显示，牛支原体生长可分为明显的4期，10 h进入对数期，30 h进入稳定期，活菌数最高可达1.0×108 CCU/mL和7.7×107 CFU/mL，75 h进入衰亡期；蛋白浓度从15 h开始迅速增长，至35 h蛋白浓度最高，为72.06 μg/mL，此后维持在58.38~70.65 μg/mL；核酸含量从15 h开始增长，至25 h后Ct值维持在15.32~17.84。结果表明，牛支原体蛋白含量在稳定期初期与活菌数具有良好的相关性。因此，在牛支原体灭活疫苗生产中，稳定期初期是最佳抗原收获时间，可用蛋白浓度法代替活菌计数法进行抗原定量。

关键词：牛支原体;抗原定量;颜色变化单位;菌落形成单位;蛋白浓度;核酸含量

基金资助：国家科技支撑计划（2015BAD12B02）；甘肃省科技支撑计划（1204NKCA071）；兰州市城关区科技计划（2012-2-1）