犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第10期北京时间：

作者：刘欢, 金红岩, 侯强, 史秋梅, 董瑞凯, 张通明, 侯绍华, 沈萍

单位：1. 河北科技师范学院预防兽医实验室, 秦皇岛 066003;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：根据GenBank中公布的犬α-干扰素（CaIFN-α）基因核酸序列，去掉信号肽后设计并合成1对引物，引入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点。以提取的犬肝脏DNA为模板，利用PCR技术扩增CaIFN-α基因，并分别克隆至表达载体pBV220、pET-32a（His标签）中，转化大肠杆菌BL21（DE3）原核表达系统。重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。纯化目的蛋白，并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性。试验结果表明，与pBV220载体连接的目的基因表达的蛋白活性较低，而与pET-32a（His标签）连接的目的基因表达的蛋白活性较高，达2.56×106 U/mL。通过分析不同载体对IFN-α的表达情况，为生产高活性的IFN奠定基础。

关键词：犬;α-干扰素;原核表达;生物学活性

基金资助：公益性行业（农业）项目“宠物疫病快速诊断与疫苗研究与示范”（201303042）