鸽白细胞介素8基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第10期北京时间：

作者：潘超, 韦天超, 农海连, 李秀凤, 蒋桂林, 苑亚东, 程二财, 磨美兰, 韦平

单位：广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004

摘要：为建立鸽白细胞介素8（interleukin-8，IL-8）基因实时荧光定量PCR检测方法，本研究根据GenBank上公布的鸽IL-8基因序列，在保守区域设计1对特异性引物，以鸽子淋巴细胞提取的核酸为模板扩增鸽IL-8基因部分片段并克隆到pMD18-T载体上。提取重组质粒通过系列制备标准品，建立鸽IL-8基因SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量PCR标准曲线，并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示，实时荧光定量PCR熔解曲线呈单一熔解峰，试验线性相关系数为1.0，IL-8基因的扩增效率为103%。敏感性结果显示最低可检测到16个拷贝数；用该方法检测其他鸽白细胞介素细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-18）和双蒸水的结果均为阴性。批间、批内变异系数均≤1.52%。因此，本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法可用于鸽IL-8 mRNA的检测，为病毒感染宿主细胞后细胞因子表达的定量分析奠定基础。

关键词：鸽;白细胞介素8;实时荧光定量PCR

基金资助：国家自然科学基金项目（31360612）；广西自然科学基金项目（2013GXNSFAA019080）