Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第10期北京时间：

作者：赵孟孟, 冯松林, 王文佳, 邢星, 冯嘉萍, 张桂红

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 国家生猪种业工程技术研究中心, 广东省动物源性人兽共患病预防 与控制重点实验室, 广州 510642;2. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002;3. 河南牧业经济学院制药工程学院, 郑州 450046;4. 广西钦州保税港区出入境检验检疫局, 钦州 535008

摘要：试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法，并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSVNsp9基因序列设计引物，建立基于SYBR Green Ⅰ检测模式的实时荧光定量PCR。结果显示，PRRSV Nsp9基因在1×104~1×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系，扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰，无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒（HEV）、猪流感病毒（SIV）、伪狂犬病病毒（PRV）基因组均无交叉反应，可重复性好，组内变异系数小，可用于临床PRRSV检测。在病毒感染细胞过程中，Nsp9基因表达量逐步升高，36 h达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;SYBRGreenⅠ;实时荧光定量PCR;Nsp9基因')">Nsp9基因

基金资助：国家自然科学基金猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究项目（31272564）；公益性行业（农业）科研专项经费（201203039）；国家生猪现代农业产业技术体系（CARS-36）项目；国家重点研发计划课题（2016YFD0500707）