PEDV、TGEV和PRoV多重RT-PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第10期北京时间：

作者：龙飞翔, 施开创, 张珍, 尹彦文, 陈汉忠, 莫胜兰

单位：1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530005;2. 广西动物疫病预防控制中心, 南宁 530001

摘要：为建立猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）及猪轮状病毒（PRoV）的快速鉴别检测方法，本试验针对PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计3对特异性引物PEDV-N、TGEV-M和PRoV-VP6，分别扩增PEDV N基因、TGEV M基因和PRoV VP6基因。经优化反应条件，成功建立了能同时检测并区分PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法可特异扩增PEDV、TGEV、PRoV相应的基因片段，而与猪瘟病毒（CSFV）、猪口蹄疫病毒（FMDV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）均无交叉反应；对PEDV、TGEV、PRoV基因重组质粒标准品的检出限分别为1.41×103、1.41×102和1.41×103拷贝/μL；在相同条件下重复试验可获得一致的结果。应用该方法对临床采集的190份腹泻病料进行检测，结果PEDV阳性42份，阳性率22.11%；TGEV阳性58份，阳性率30.53%；PRoV阳性34份，阳性率17.89%，且存在不同病毒混合感染的现象。结果表明，所建立的多重RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点，可用于PEDV、TGEV和PRoV的临床检测和流行病学调查。

关键词：猪流行性腹泻病毒;猪传染性胃肠炎病毒;猪轮状病毒;多重RT-PCR;检测方法

基金资助：广西水产畜牧科技项目（桂渔牧科201528017）