猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第11期北京时间：

作者：程福亮, 李复辉, 刘洋庆, 聂兆晶, 陈甜甜, 房栋, 樊梅娜, 谷巍, 王春凤

单位：1. 山东宝来利来生物工程股份有限公司, 泰安 271000;2. 吉林农业大学动物科技学院, 长春 130118

摘要：为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法，本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白，亲和层析纯化后作为包被抗原，通过对各反应条件优化选择，建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法，并进行了交叉反应和重复性试验，以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2 μg/mL，血清最佳稀释度为1∶100，血清及酶标二抗孵育时间均为30 min，显色时间为10 min，检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性；该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%；与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征;N蛋白;ELISA

基金资助：国家自然科学基金（30200199）；吉林省科技厅项目（20020220）