猪PD-1及其配体PD-L1和PD-L2 SYBR GreenⅠ Real-time PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第11期北京时间：

作者：岳锋, 周娟娟, 朱艳平, 李鹏, 孙国鹏, 王选年

单位：1. 新乡学院生命科学技术学院, 新乡 453003;2. 新乡学院生物技术研究所, 新乡 453003

摘要：本试验旨在研究猪PD-1及其配体在疾病状态下的转录水平，建立检测猪PD-1及其配体的Real-time PCR方法。根据GenBank中猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因序列，分别设计3对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收目的基因片段与pMD18-T连接后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，提取重组质粒，经PCR及测序鉴定正确，作为标准品绘制标准曲线，并进行特异性和重复性检测。结果显示，Real-time PCR的Ct值与模板浓度对数呈良好的线性反比关系，相关系数R2>0.99，熔解曲线出现狭窄单一峰；Real-time PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，呈单一目的条带，无引物二聚体，特异性强；组内和组间重复性检测结果显示，组内和组间的变异系数均小于3%，重复性好；用建立的Real-time PCR方法检测猪自然感染PCV2后PD-1及其配体转录水平，PD-L1和PD-L2转录水平极显著或显著升高（P0.05）。本试验建立了检测猪PD-1、PD-L1和PD-L2 mRNA的Real-time PCR方法并进行了初步应用，为猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因表达模式研究奠定基础。

关键词：Real-timePCR;PD-1;PD-L1;PD-L2

基金资助：国家自然科学基金（31291877）；新乡学院科技创新基金重点培育项目（15ZP03）；新乡学院博士启动科研项目（1366020053）