VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第11期北京时间：

作者：王娜, 刘彦双, 刘宁, 金超, 张喜路, 金月, 薛书江

单位：1. 延边大学农学院, 延吉 133002;2. 龙井市畜牧站, 龙井 133400;3. 龙井市畜牧业管理局, 龙井 133400;4. 梅河口市畜牧总站, 梅河口 135000;5. 大连市金州新区动物卫生监督所, 大连 116100

摘要：为了探索新型弓形虫疫苗的传递系统，本试验分别构建了细胞渗透肽VP22与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的重组质粒（pcDNA-VP22-EGFP），以及细胞渗透肽VP22与3种弓形虫抗原融合表达的重组质粒（pcDNA-VP22-SAG1、pcDNA-VP22-GRA4、pcDNA-VP22-AMA1）。经PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定后，将重组质粒pcDNA-VP22-EGFP转染COS7细胞，通过荧光显微镜和RT-PCR检测，验证VP22-EGFP基因在COS7细胞中的表达情况。PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定结果显示所有重组质粒均构建正确。转染72 h后的细胞，在荧光显微镜下成功观察到绿色荧光。RT-PCR扩增得到了大小为1 449 bp的目的条带，与预期结果一致。结果表明，重组质粒构建成功。

关键词：细胞渗透肽VP22;弓形虫;真核表达

基金资助：国家自然基金（31460657）；吉林省科技厅青年科研基金（20150520129JH）