猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第11期北京时间：

作者：赵孟孟, 钱娟娟, 崔甜甜, 冯松林, 王文佳, 邢星, 冯嘉萍, 张桂红

单位：1. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002;2. 华南农业大学兽医学院, 国家生猪种业工程技术研究中心, 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室, 广州 510642;3. 中国科学院动物研究所膜生物学国家重点实验室, 北京 100101;4. 河南牧业经济学院制药工程学院, 郑州 450046;5. 广西钦州保税港区出入境检验检疫局, 钦州 535008

摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶，在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性，本研究利用反向遗传学技术将PRRSV弱毒疫苗毒CH-1R的Nsp9基因进行克隆，酶切后连接到强毒株XH-GD的感染性克隆上，进行病毒的拯救。结果表明，成功构建替换了CH-1R Nsp9基因的重组病毒。对重组病毒的生物学特性研究发现，拯救病毒的生长速度和病毒滴度明显高于亲本毒株rXH-GD，但是低于疫苗毒CH-1R，重组毒株的噬斑大小与CH-1R相似，初步推测疫苗株CH-1R的聚合酶有助于提高病毒的滴度。本试验为进一步研究Nsp9基因对病毒毒力的影响奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;Nsp9基因')">Nsp9基因;反向遗传学;病毒拯救

基金资助：国家自然科学基金：猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究项目（31272564）；公益性行业（农业）科研专项经费（201203039）；国家生猪现代农业产业技术体系项目（CARS-36）；国家重点研发计划课题（2016YFD0500707）