新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第12期北京时间：

作者：梅敏敏, 梁国智, 黄雯晶, 李晓文, 黄淑坚

单位：佛山科学技术学院生命科学学院, 佛山 528231

摘要：为制备新型鸭呼肠孤病毒（new-type duck reovirus，NDRV）XX株σB蛋白的多克隆抗体，试验经RT-PCR扩增NDRV XX株σB基因编码序列，构建原核表达质粒pET-32a（+）-σB，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后，经IPTG诱导获得His-σB重组蛋白。SDS-PAGE显示成功表达出约55 ku的融合蛋白，主要以包涵体形式存在，其表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度分别为3 h和0.25 mmol/L。经Ni2+柱亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白，将蛋白经Western blotting和蛋白质谱鉴定为高纯度的σB重组蛋白，将纯化后σB重组蛋白按合理免疫程序免疫家兔，获得多抗隆抗体经Western blotting分析显示出特异性的反应。本试验结果为NDRV σB蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研发奠定了基础。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒;σB蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：广东省家禽重大传染病控制技术研究（2012A020100001）