大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第12期北京时间：

作者：张秀娟, 杨杰, 孙永强, 高凤山

单位：大连大学生命科学与技术学院, 大连 116622

摘要：为构建大约克猪SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白，试验设计1对引物，经PCR扩增获得大约克猪SLA-1胞外区基因（命名为SLA-1-DYKe），将此片段克隆至pMD®19-T Simple Vector，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切筛选阳性克隆菌并测序，将目的基因插入到原核表达载体pET-28a（+）中，转化至宿主菌BL21（DE3）进行诱导表达，用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况，大量诱导提取包涵体并检测。结果显示，PCR成功扩增SLA-1-DYKe的胞外区，得到大小为837 bp的目的基因，目的基因成功克隆至pMD®19-T Simple Vector，并获得序列正确的重组质粒。以得到的重组质粒成功构建了SLA-1-DYKe/pET-28a（+）表达载体，目的蛋白大小约为34 ku。本研究成功构建了大约克猪SLA-1原核表达载体，获得了表达蛋白，为今后研究大约克猪SLA-1的空间结构和基因功能奠定了基础。

关键词：大约克猪;SLA-1基因')">SLA-1基因;原核表达载体

基金资助：国家自然科学基金项目：猪源病毒CTL多肽表位与SLA-Ⅰ结晶研究（31172304）；2015年辽宁省大学生创新创业训练计划项目：育-大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达研究（20150086）；2014年大连大学大学生创新创业训练计划项目重点项目：育-大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达研究（2014066）