猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第12期北京时间：

作者：李建达, 于江, 张玉玉, 任素芳, 陈蕾, 郭立辉, 孙文博, 陈智, 王淞, 刘俊珍, 杜以军, 李俊, 杨灵芝, 王金宝, 吴家强

单位：1. 青岛农业大学动物科技学院, 青岛 266109;2. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所, 济南 250100;3. 山东滨州沃华生物工程有限公司, 滨州 256600

摘要：试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计CPS2J基因特异性引物，建立猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法的标准曲线为y=-3.073x+36.87，r=0.995，熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示，该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×101拷贝/μL，是普通PCR的10倍；特异性试验显示，对猪链球菌2型具有良好的特异性，能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌；重复性试验变异系数为0.37%~0.63%，均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规PCR方法和细菌分离的方法。以上结果表明，本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好，有利于对猪链球菌2型的快速检测。

关键词：猪链球菌2型;实时荧光定量PCR;敏感性;特异性;重复性

基金资助：泰山学者特聘专家工程经费；山东省现代农业产业技术体系（SDAIT）；山东省农业科学院重大科技成果培育计划（2014CGPY04）；山东省农业重大应用技术创新项目；山东省自然科学基金（ZR2015YL078）；山东省农业科学院青年科研基金（2015YQN51）；山东省农业科学院农业科技创新工程项目（CXGC2016B14）