H9和H6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第12期北京时间：

作者：李丹, 谢芝勋, 宋德贵, 李孟, 谢志勤, 罗思思, 谢丽基, 黄莉, 范晴, 黄娇玲

单位：1. 广西师范大学生命科学学院, 桂林 541000;2. 广西壮族自治区兽医研究所, 广西兽医生物技术重点实验室, 南宁 530001

摘要：试验旨在建立可同时鉴别检测H9和H6亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）的二重RT-PCR方法。根据GenBank中H9和H6亚型AIV的HA基因保守序列，分别设计2对特异性引物，优化引物浓度与退火温度等条件，建立了可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的二重RT-PCR检测方法。用该法对H9和H6亚型AIV混合感染样品、H9亚型AIV单一感染样品和H6亚型AIV单一感染样品进行扩增，结果均得到对应的目的条带，而对其余亚型AIV及其他禽病病原体均未扩增出特异性条带。该法对H9和H6亚型AIV的检测下限均为5×104拷贝/μL。本研究建立的二重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、稳定性和重复性良好，可同时鉴别检测H9与H6两种亚型AIV，为H9与H6亚型AIV的监测提供技术支撑。

关键词：禽流感病毒;H9亚型;H6亚型;二重RT-PCR

基金资助：国家“万人计划”领军人才专项（2016-37-88）；广西科技项目（2013GXNSFDA019015、AD163800009、14123001-8）；广西水产畜牧局科研项目（桂渔牧科201204930、201452001）