伽氏疏螺旋体尚志株P66基因的原核表达与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第1期北京时间：

作者：于培发, 刘志杰, 牛庆丽, 杨吉飞, 王振国, 翟斌涛, 潘玉平, 关贵全, 罗建勋, 殷宏

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046;2. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：为获得伽氏疏螺旋体尚志株（B. garinii SZ）的P66蛋白，本研究从培养的螺旋体菌液中提取总RNA，反转录合成第一链cDNA，利用PCR扩增P66基因。将目的片段连接表达载体pET-30a（+），并转化大肠杆菌表达菌BL21（DE3），经PCR、双酶切及测序验证正确后，进行IPTG诱导表达和纯化，然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示，获得约70 ku的表达产物；Western blotting分析表明，表达产物与抗His标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗P66多克隆抗体均能发生反应，获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了B. garinii SZ株P66蛋白，并制备了多克隆抗体，为后续B. garinii SZ株P66蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：伽氏疏螺旋体尚志株;P66;原核表达;多克隆抗体

基金资助：农业科技创新工程（ASTIP）；国家肉牛牦牛产业技术体系（NBCISCARS-38）