水貂白细胞介素-4基因的克隆、序列分析与原核表达

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第1期北京时间：

作者：范思宁, 张海玲, 赵建军, 王洋, 胡博, 吕爽, 马凡舒, 李欣彤, 凌明玉, 赵辉, 廉士珍, 闫喜军

单位：1. 吉林农业大学动物科学技术学院, 长春 130118;2. 中国农业科学院特产研究所, 长春 130112

摘要：为了获得高纯度的白细胞介素-4（IL-4）蛋白，对分离得到的水貂外周血淋巴细胞经植物血凝素（PHA）诱导后，提取淋巴细胞总RNA，根据GenBank中登录的雪貂IL-4基因序列，设计并合成特异性引物，通过RT-PCR扩增获得了水貂IL-4基因序列全长399 bp，编码132个氨基酸，与雪貂氨基酸序列同源性高达99.2%，与熊猫、犬同源性均为90.0%。将编码成熟蛋白基因构建到原核表达载体pProEX-HTb，IPTG诱导后，SDS-PAGE及Western blotting结果显示，IL-4表达产物为15 ku的包涵体蛋白。通过His-Trap HP亲和层析预装柱变性、复性洗脱可获得高纯度的重组IL-4蛋白。本试验为水貂IL-4基因的进一步研究奠定了基础。

关键词：水貂;白介素-4;序列分析;原核表达

基金资助：吉林省科技发展计划项目（20140520172JH）；吉林省科技发展计划项目（20140307002NY、20140204072NY）