鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第2期北京时间：

作者：傅秋玲, 刘伟, 黄瑜, 傅光华, 万春和, 程龙飞, 陈红梅, 施少华, 刘荣昌, 陈珍, 陈翠腾, 林建生

单位：1. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福州 350013;2. 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心, 福州 350013;3. 福建省禽病防治重点实验室, 福州 350013

摘要：为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型（DHAV-1a）结构蛋白VP1的单克隆抗体（MAbs），本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠，同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原，建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性，获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞（1A2和5G3）。MAbs腹水ELISA效价分别为1：3.2×104和1：2.0×106。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blotting结果显示，2株MAbs均能与DHAV-1a VP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒（DHAV-1）和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验结果显示5G3株具有中和活性。结果表明2株MAbs的ELISA效价高、特异性强、稳定性好，均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应，其中一株具有中和活性。

关键词：鸭1型甲肝病毒亚型;单克隆抗体;生物学特性

基金资助：国家自然科学基金（31472222）；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-43）；福建省公益类科研院所专项（2014R1023-3、2015R1023-3和2016R1102）；福建省农业科学院畜牧兽医研究所基金（MYQJ2015-6）；福建省优良蛋鸭品种与设施化养殖创新产业化工程项目（2014-2016）