口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第2期北京时间：

作者：姚怀兵, 赵毅, 刘宏, 张毅, 任方, 黄炯

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 新疆畜牧科学院兽医研究所, 乌鲁木齐 830000;3. 天康生物股份有限公司, 乌鲁木齐 830000

摘要：试验通过对口蹄疫病毒核苷酸序列的比对分析，在O型口蹄疫病毒的P1基因保守区，设计1对特异性引物，应用均匀设计法优化反应参数，建立口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性试验、敏感性试验检测。结果表明，该二温式RT-PCR方法只对口蹄疫O型病毒敏感，对其他血清型的口蹄疫病毒及常见的猪病病毒均不敏感；扩增条带与预期目的片段大小相符，扩增片段经克隆、测序发现与引物所在基因序列的同源性为100%；检测病毒RNA的敏感性为1.665 pg/μL，其敏感性与三步法PCR敏感性检测结果没有差异。运用该法对54头攻毒试验的动物进行检测，阳性鉴定结果与三步法PCR鉴定结果一致，与三步法PCR相比该法节省了20 min，表明所建立的口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR方法是一种准确、快速、特异、敏感的检测方法。

关键词：口蹄疫O型病毒;二温式RT-PCR;检测方法

基金资助：自治区科研机构创新发展专项资金（2016D04008）；自治区产学研联合培养研究生示范基地项目（xjaucxy-yjs-20152008）