猪源大肠杆菌脂多糖的提取、纯化及活性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第3期北京时间：

作者：冯将, 王玉坤, 魏玉好, 易琼, 王鲁, 鲜思美

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 贵州大学生化工程中心, 贵阳 550025

摘要：为了从猪源大肠杆菌中获得纯度高、产率高的脂多糖（lipopolysaccharides，LPS），并评价其毒力，本试验采集仔猪腹泻粪便作为病料，进行细菌分离鉴定和16S rDNA鉴定，采用热酚水法提取细菌的LPS，通过DNaseⅠ、RNaseA、蛋白酶K和醇沉法对LPS进行纯化，通过苯酚硫酸法、Bradford法和紫外分光光度法测定LPS多糖、蛋白及核酸含量，鲎试剂定量法测定其活性，采用小鼠急性毒性试验方法测定小鼠半数致死量（LD50）。结果显示，分离获得一株具有高致病性的猪源大肠杆菌，纯化的猪源大肠杆菌LPS平均产率为3.74%，其中多糖含量为13.40%，蛋白含量为0.48%，核酸含量为0.06%，主要条带集中在14~160 ku范围内，鲎试剂定量法测定其活性为1.21×107 EU/mg，提取LPS对小鼠的LD50为31.86 mg/kg。该猪场仔猪腹泻是由致病性大肠杆菌引起，获得其毒力因子LPS纯度高、产率高、毒力强，这将为临床防制猪大肠杆菌病及LPS提取纯化提供理论依据。

关键词：大肠杆菌;提取纯化;脂多糖;急性毒性试验

基金资助：国家自然科学基金项目（31470128）；贵州省科技厅、省农科院联合基金项目[黔科合LH字（2014）7701]；贵州省科学技术基金项目[黔科合LH字（2014）7667]；贵州省动物疫病防控与兽医公共卫生保障科技创新人才团队[黔科合人才团队（2015）4016]