牛支原体HB0801株VspX蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第3期北京时间：

作者：陈曦, 朱洪梅, 赵刚, 胡长敏, 陈颖钰, 郭爱珍

单位：华中农业大学动物医学院, 农业微生物国家重点实验室, 武汉 430070

摘要：为获得牛支原体（Mycoplasma bovis，M.bovis）VspX蛋白单克隆抗体，将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化，作为免疫原，以QuickAntibody-Mouse 5W为免疫佐剂，免疫BALB/c小鼠。经3次免疫后，将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经3次亚克隆筛选后，共获得5株能稳定分泌抗VspX蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A8、3A3、3C12、3H9及4D11。亚型鉴定表明，3C12重链为IgG2b，其余4株为IgG1，轻链均为κ链。间接ELISA结果表明，5株细胞培养上清的抗体效价在1：1×104~1：2×105，腹水效价在1：1×105~1：8×105。选其中两株杂交瘤细胞株3H9和4D11的腹水纯化，进行亲和力测定，解离常数分别为6.3×109和7.8×109，属高亲和力抗体。Western blotting结果显示，5株单抗均能与牛支原体发生特异性反应，而单抗4D11与羊无乳支原体标准株PG2和丝状支原体丝状亚种标准株PG3均不反应。流式细胞术结果表明，单抗4D11与牛支原体表面的VspX的结合呈剂量依赖性。间接免疫荧光结果表明，单抗4D11可以识别黏附到胚胎牛肺细胞上的重组VspX蛋白。本试验成功制备的单克隆抗体为VspX蛋白功能的研究奠定基础。

关键词：牛支原体;VspX蛋白;单克隆抗体;特异性

基金资助：国家自然科学基金（31302111、31272587）；中央高校基本科研业务费专项资金（2013QC001）