禽呼肠孤病毒σA基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第3期北京时间：

作者：卢恒, 谢芝勋, 谢丽基, 黄莉, 黄娇玲, 王盛, 张艳芳, 曾婷婷, 范晴, 罗思思, 谢志勤, 邓显文

单位：1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004;2. 广西壮族自治区兽医研究所, 广西兽医生物技术重点实验室, 南宁 530001

摘要：为了筛选与禽呼孤病毒σA基因相互作用的宿主蛋白，本试验应用酵母双杂交技术构建禽呼孤病毒σA基因的诱饵载体pGBKT7-σA。从禽呼肠孤病毒S1133标准毒株抽提RNA，采用RT-PCR方法扩增得到σA基因片段，将其连接到诱饵载体pGBKT7上，把通过测序的重组诱饵载体命名为pGBKT7-σA。将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y2HGold后，把不同浓度的诱饵载体转化液涂布在营养缺陷型培养基上，观察该重组诱饵载体在酵母细胞中有无毒性作用和自激活现象。结果显示，酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-σA构建成功，且对酿酒酵母无毒性和自激活现象。本研究为进一步利用酵母双杂交技术筛选与σA蛋白互作的宿主蛋白奠定了基础。

关键词：禽呼肠孤病毒;σA基因')">σA基因;酵母双杂交;诱饵载体

基金资助：国家自然科学基金项目（31660715、31160512）；国家"万人计划"领军人材专项（2016-37）；广西特聘专家专项（2011B020）