托佩克猪SLA-1-632-TPK基因的矫正及重组质粒SLA-1-TPK/pMD19-T的构建

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第6期北京时间：

作者：翟晓鑫, 高花, 韩勇, 高凤山

单位：大连大学生命科学与技术学院, 基因和蛋白质工程实验室, 大连 116622

摘要：猪白细胞抗原（swine leukocyte antigen，SLA）在猪免疫系统中起递呈抗原作用，对其展开研究可为猪相关传染病的预防提供依据。研究发现，托佩克猪SLA-1-632-TPK基因编码序列发生碱基缺失（距离SLA-1-632-TPK基因5'端632 bp处丢失1个碱基"C"），导致移码突变。为矫正SLA-1-632-TPK基因，设计2对矫正引物，以原重组质粒SLA-1-632-TPK/pMD18-T为模板，利用剪切重叠延伸PCR（splicing overlap extention PCR，SOE-PCR）技术分别扩增SLA-1-632-TPK 5'和3'端，之后进行拼接，最后扩增全序列从而矫正目的基因，并进一步连接pMD19-T Simple载体，通过单菌落PCR筛选阳性克隆并测序，并通过GENETYX version 9.0软件对所测序列进行分析。结果显示，SOE-PCR成功扩增得到5'和3'端片段，大小约为650和590 bp，与理论设计值大小（648和585 bp）接近，经过拼接以后，得到全长约1 200 bp，与理论设计值1 223 bp接近。菌落PCR结果显示，矫正基因成功克隆入pMD19-T Simple载体。序列分析结果显示，托佩克猪SLA-1-632-TPK基因距离5'端632 bp处丢失的碱基"C"得到矫正并正确编码。本研究成功矫正了SLA-1-632-TPK基因，并构建其重组质粒SLA-1-TPK/pMD19-T，为下一步研究SLA-1-TPK蛋白表达和相关功能奠定基础。

关键词：托佩克猪;SLA-1基因')">SLA-1基因;基因矫正;剪切重叠延伸PCR（SOE-PCR）

基金资助：国家自然科学基金项目：猪源病毒CTL多肽表位与SLA-Ⅰ结晶研究（31172304）；国家自然科学基金项目：CRISPR/Cas9技术构建ST2细胞系筛选猪源病毒SLA-Ⅰ限制性CTL表位的研究（31672525）；辽宁省教育厅重点实验室项目（LZ2015003）