猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3C的原核表达及生物信息学分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第6期北京时间：

作者：罗亚坤, 梁琳, 朱禹, 王静, 刘琪, 刘存, 崔尚金

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：为获得猪脑心肌炎病毒（EMCV）3C蛋白并进一步了解其结构，本研究以EMCV HB10株的RNA为模板，通过RT-PCR扩增3C基因，将其克隆至pMD18-T载体，经PCR、双酶切和测序鉴定，挑选测序正确的质粒经双酶切获得目的片段并将其克隆至pET32a载体以构建重组原核表达质粒。将重组质粒转化至大肠杆菌TranSetta（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后，SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况，Western blotting检测纯化后3C蛋白及其对EMCV的反应原性。结果显示，成功克隆3C基因，长度为615 bp，编码205个氨基酸。SDS-PAGE结果显示，3C蛋白主要以包涵体形式表达，His-3C蛋白大小约为40 ku。Western blotting分析可知，纯化后His-3C蛋白条带单一，同时3C蛋白与EMCV细胞毒有良好的反应原性。经生物分析软件预测可知，EMCV 3C蛋白为非分泌蛋白，无跨膜区，有多个磷酸化位点，参与蛋白的水解过程。3C蛋白酶作为EMCV基因组编码蛋白中唯一的蛋白酶，在病毒复制的过程中具有不可或缺的作用。本研究成功构建了EMCV 3C蛋白原核表达载体并对其结构进行了预测，为进一步研究3C蛋白的作用及催化机理奠定基础。

关键词：脑心肌炎病毒;3C蛋白酶;原核表达;生物信息学分析

基金资助：中国农业科学院创新工程项目（ASTIP-IAS15）