猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：王淑娟, 刘梅芬, 闫若潜, 班付国, 赵雪丽, 马震原, 王华俊, 王翠, 赵明军

单位：河南省动物疫病预防控制中心, 郑州 450008

摘要：为建立一种快速、敏感、特异的猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）实时荧光定量PCR检测方法，本研究根据GenBank中CSFV E2基因保守区域序列，设计了一对特异性引物和一条特异性探针，以CSFV总RNA为反转录模板，经优化反应条件，建立CSFV实时荧光定量PCR检测方法，并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验；利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了检测。结果表明，本研究建立的CSFV实时荧光定量PCR检测方法在101~106拷贝/μL范围内有很好的线性关系，相关系数为0.999；CSFV细胞培养物出现阳性扩增信号，但ST正常细胞对照和其他8种病原对照未出现扩增，特异性良好；该方法重复性好、敏感性高，最低检测模板浓度为10拷贝/μL，并且CSFV的最低检测限为1 TCID50/mL；自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品，与本课题组建立的CSFV Nested RT-PCR检测结果和克隆测序结果一致。本研究成功建立了CSFV实时荧光定量PCR检测方法，可用于CSFV的快速检测。

关键词：猪瘟病毒;实时荧光定量PCR;特异性;重复性;敏感性;应用

基金资助：河南省科技创新人才计划项目"猪重要疫病快速检测集成技术研究"（174200510003）