传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：高祥, 李辉, 张礼洲, 卢珍, 王永强, 高立, 吴甜甜, 高玉龙, 刘长军, 王笑梅, 祁小乐

单位：1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室, 禽传染病研究室, 哈尔滨 150069;2. 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心, 扬州 225009

摘要：为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2，本研究克隆了传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus，IBDV）超强毒株Gx的VP2基因，并亚克隆至载体pCold-Ⅰ，进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2，在Transetta（DE3）工程菌中优化条件进行IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达，运用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤两种技术串联的方法进行蛋白纯化，运用单克隆抗体介导的Western blotting技术鉴定纯化蛋白的特异性，免疫SPF鸡鉴定纯化蛋白的免疫活性。结果显示，在冷休克条件下，IBDV衣壳蛋白VP2在Transetta（DE3）工程菌中实现了可溶性表达；通过纯化获得了高纯度的VP2，浓度为542 μg/mL；该蛋白不仅能与VP2单克隆抗体特异性反应，还能刺激鸡产生特异性免疫应答，具有良好的免疫活性。本研究在IPTG为1 mmol/L，15℃、120 r/min，诱导时间为24 h的条件下，实现了有免疫活性的IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达和纯化。高纯度、可溶、具有功能活性的衣壳蛋白的制备，为深入开展IBDV致病机制研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒;衣壳蛋白;可溶性表达;纯化

基金资助：国家自然科学基金重点项目（31430087）；哈尔滨市应用技术研究与开发项目（2014AB3AN058）；现代农业产业技术体系建设专项基金（CARS-42-G07）；哈尔滨市科技创新人才项目（2014RFQYJ129）