牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：张通明, 宋天琪, 鑫婷, 朱鸿飞, 贾红

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体，鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因，构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis，经双酶切和测序鉴定其正确性，利用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中，采用SDS-PAGE和Western blotting技术检测牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达，质谱鉴定目的蛋白氨基酸序列。研究结果表明，成功构建了牛分枝杆菌eis基因穿梭表达载体pMV261-Mbeis；生长曲线表明负载重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长；SDS-PAGE和Western blotting检测证实了牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中可表达出分子质量约44 ku的eis蛋白；质谱检测证明了该蛋白即为牛分枝杆菌eis蛋白。本研究构建的牛分枝杆菌eis基因穿梭表达质粒pMV261-Mbeis在耻垢分枝杆菌中具有生物学活性，为下一步研究表达产物eis蛋白的功能奠定了基础。

关键词：eis基因')">eis基因;pMV261;耻垢分枝杆菌

基金资助：国家自然科学基金（31302130）；中国农业科学院科技创新工程（ASTIP-IAS-11）