从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：赵佳福, 段志强, 杨远青, 嵇辛勤, 王圆圆, 孙成娟

单位：1. 贵州大学, 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室, 贵阳 550025;2. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;3. 贵州省毕节市畜禽遗传资源管理站, 毕节 551700

摘要：试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，ApoA1）基因，研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA，采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒，并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后，转染HEK-293T细胞，36 h后观察荧光，分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明，从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比，有6处发生了碱基突变，其中5处为有义突变，分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸；PSORT Ⅱ Prediction和荧光共定位试验结果均表明，ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质，约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区，且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中，为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。

关键词：丛江香猪;ApoA1基因')">ApoA1基因;pEGFP-C1载体;HEK-293T细胞;生物信息学分析;亚细胞定位

基金资助：省校联合基金（黔科合LH字[2014]7668）；贵州省科技重大专项（黔科合重大专项字[2013]6008号）；贵州大学青年基金（贵大自青基合字[2012]010号）