羊种布鲁氏菌dhbC基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：李宝宝, 聂鑫, 杨小健, 曹瑞勇, 朱姝, 黄海峰, 张振兴, 彭冬梅, 李国华, 李亚颖, 王凤阳, 杜丽

单位：海南大学热带农林学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

摘要：试验旨在对羊种布鲁氏菌dhbC基因进行克隆及原核表达，并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中布鲁氏菌M5-90株dhbC基因序列信息设计1对引物，通过PCR反应扩增获得dhbC基因片段。将得到的dhbC基因连接到pMD20-T载体，构建pMD20-T-dhbC重组质粒并转化大肠杆菌（E.coli） DH5α感受态细胞，提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pET28a-dhbC重组质粒，转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞。经IPTG诱导表达，表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。运用生物信息学软件DNAMAN及相关在线网站ProtParam、SOPMA及Protscale对dhbC基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明，试验成功克隆了大小约为1 093 bp的dhbC基因并进行了蛋白表达，表达的融合蛋白大小约为47 ku，且主要以包涵体形式存在。dhbC蛋白的分子式为C1866H2968N544O562S15，分子质量为42 496.3 u，理论等电点（pI）为5.81，消光系数为33 835，不稳定系数为36.76，疏水指数为86.19，总平均疏水性（GRAVY）为-0.215。预测在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h，其二级结构以α-螺旋（41.94%）和无规则卷曲（31.46%）为主。

关键词：布鲁氏菌;dhbC基因')">dhbC基因;克隆;原核表达;生物信息学分析

基金资助：国家自然科学基金（31460670）；海南省重大科技计划项目（ZDKJ2016017-01）