Red两步同源重组法在大肠杆菌基因敲除中的应用

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第7期北京时间：

作者：李鑫, 李亚芯, 戴建君

单位：南京农业大学动物医学院, 南京 210095

摘要：基因敲除是研究基因功能最直接的方法。对于大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）而言，传统的基因敲除方法是利用其原有的RecA系统，此方法依赖于特定的限制性内切酶酶切位点，且所需同源臂长，操作复杂。Red同源重组法的出现使得基因组的改造更为快速、简单，在E.coli基因敲除中的应用也愈加广泛和成熟。作者介绍了Red同源重组系统的组成和同源重组原理，阐述了常用的两步同源重组法敲除E.coli基因的操作步骤及注意事项。大肠杆菌的两步法基因敲除技术已在工程菌改造、病原菌致病机理、耐药机制研究等领域做出巨大贡献，由于两步法仍保留有Red同源重组系统电转效率低、有序列残留的缺陷，作者对几个针对两步法的经典的无痕化改造进行了总结介绍，通过对以上方法及应用进行综述，为以大肠杆菌作为工程菌的基因敲除技术提供参考。

关键词：大肠杆菌;Red同源重组;基因敲除;两步法

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