抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第8期北京时间：

作者：吴靖, 许健, 黄秀芬, 沈俊俊, 何后军, 李永清

单位：1. 江西农业大学动物科学技术学院, 南昌 330045;2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所, 畜禽疫病防控技术北京市重点实验室, 北京 100097

摘要：为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV） gD蛋白特异性单链抗体，试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因，通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因，将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中，构建重组转移载体pFB-VH-VL，将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VH-VL，将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30 ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示，重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合，也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示，该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体，为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒;囊膜糖蛋白gD;单链抗体;杆状病毒表达系统

基金资助：国家重点研发计划-畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发（2016YFD0500900）；现代农业产业技术体系北京市奶牛创新团队岗位专家资助经费项目（bjcystx-ny-3）