3种中毒性弧菌融合毒素基因的表达与免疫学性质研究

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第8期北京时间：

作者：李涛, 许文超, 宿雅彬, 马飞, 崔奕杰, 李华锋

单位：唐山出入境检验检疫局, 唐山 063000

摘要：为构建3种中毒性弧菌多联融合毒素基因及重组表达载体，制备多联融合毒素的血清抗体，本试验采用柔性Linker序列（Gly4Ser）对目的基因进行串联（tdh-vvhA-ctB），构建重组表达质粒pET-22b（+）-TVC并在原核表达载体内进行表达，将表达蛋白纯化后免疫动物制备多联融合毒素血清抗体，利用琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验验证抗体的特异性与敏感性。结果表明，试验成功构建了多联融合毒素重组表达质粒pET-22b（+）-TVC，并在原核表达载体内成功表达，表达量为11.38%，表达蛋白主要为包涵体，少量为可溶性蛋白，基因序列全长2 196 bp，编码731个氨基酸，蛋白分子质量为81.7 ku，测序结果与设计序列同源性为99.6%。ELISA和琼脂扩散试验表明，融合毒素TVC与3种目标中毒性弧菌均发生反应，与多种非目标菌均不反应。本试验成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒并制备了抗血清，为利用重组毒素的方法检测目标毒素，进而建立更广谱的食物中毒菌快速检测方法奠定基础。

关键词：中毒性弧菌;多联融合毒素;表达;免疫学特性

基金资助：河北出入境检验检疫局科技项目（HE2014K034）