水牛Smad4基因的克隆及其真核表达载体的构建

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第8期北京时间：

作者：鄢胜飞, 张秀芳, 黄玥萌, 郑海英, 杨春艳, 覃广胜, 黄加祥, 尚江华

单位：中国农业科学院广西水牛研究所, 广西水牛遗传繁育重点实验室, 南宁 530001

摘要：为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制，试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因，对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析，构建Smad4基因的真核表达载体，通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明，试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列，编码区全长为1 662 bp，编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对，结果显示，水牛Smad4基因与牛的同源性为99%，与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明，Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4，并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因，并成功构建了Smad4基因的真核表达载体，为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。

关键词：水牛;Smad4基因')">Smad4基因;克隆;真核表达载体

基金资助：广西科技计划项目（桂科AB16380040）；广西自然科学基金（2014GXNSFAA118116）；广西水产畜牧兽医局科技项目（桂渔牧科201633052）；广西水牛研究所基本科研业务费（水牛基1404004、160204、1705001）