猪流行性腹泻病毒CH-HuN1301株N基因重组表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第8期北京时间：

作者：唐青海, 杨海, 黎露, 陈果亮, 何丽芳, 刘最, 王芳宇

单位：1. 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 衡阳 421008;2. 衡阳师范学院生物药物研究所, 衡阳 421008;3. 衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心, 衡阳 421008

摘要：本研究旨在建立猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV） CH-HuN1301株N蛋白稳定表达细胞系。采用RT-PCR扩增PEDV新流行毒株CH-HuN1301株N基因，分别克隆至原核表达载体pET28a和真核表达载体pEGFP-C1构建重组表达载体，所测定的序列采用Mega 5.0软件进行进化分析。将原核表达的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，重组真核表达载体pEGFP-PEDV-N转染HEK293细胞，经用G418筛选获得稳定的表达细胞系。荧光倒置显微镜观察细胞荧光，免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测N蛋白的表达。结果表明，PEDV HuN1301-14毒株N基因大小为1 323 bp，原核表达重组N蛋白分子质量约60 ku，其多克隆抗体与PEDV呈特异性反应，荧光倒置显微镜观察和IPMA检测结果显示N蛋白在HEK293细胞中稳定表达。该细胞系的建立为进一步研究PEDV的诊断方法提供了基础材料。

关键词：猪流行性腹泻病毒;CH-HuN1301毒株;N基因')">N基因;稳定细胞系

基金资助：国家自然科学基金青年基金（31101837）；衡阳师范学院引进人才专项项目（16D20）；湖南省教育厅优秀青年项目（17B038）