羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第8期北京时间：

作者：曹瑞勇, 聂鑫, 李宝宝, 张振兴, 黄海峰, 李亚颖, 彭冬梅, 李国华, 朱姝, 杨小健, 杜丽, 王凤阳

单位：海南大学热带农林学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

摘要：为克隆羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因，并对其编码的蛋白进行生物信息学分析，以类鼻疽伯克霍尔德菌基因组为模板，参照GenBank中Burkholderia pseudomallei K96243株基因组DNA序列（登录号：NC_006351.1）设计引物，PCR扩增BPSS1512基因，构建重组质粒，SDS-PAGE和Western blotting分析其蛋白表达，DNAMAN等软件对BPSS1512基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示，PCR扩增成功得到1 425 bp的特异性条带，BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后得到约为5 000和1 500 bp的条带，表明重组质粒pET-28a-BPSS1512构建成功，IPTG浓度为10 mmol/L，诱导时间8 h为最适宜的诱导条件。BPSS1512基因编码的蛋白质分子质量为53 ku，在包涵体中表达；在BPSS1512蛋白二级结构中，α-螺旋、延伸链和无规卷曲分别占24.05%、14.77%、61.18%，并且疏水性区域分布在-2.0~+2.4之间，说明BPSS1512蛋白具有较强的疏水性，本试验结果可为类鼻疽病的防制提供参考依据。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌;BPSS1512基因')">BPSS1512基因;克隆;原核表达;生物信息学分析

基金资助：国家肉羊产业技术体系（CARS-38）；海南省重大科技计划项目（ZDKJ2016017-01）