水泡性口炎病毒N蛋白原核表达及免疫原性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第9期北京时间：

作者：张雪, 娄丽, 陈阳, 周晓丽, 刘钊, 贾赟, 孙颖杰

单位：1. 辽宁出入境检验检疫局, 大连 116001;2. 丹东出入境检验检疫局, 丹东 118000;3. 四川出入境检验检疫局, 成都 610000

摘要：本研究旨在克隆和表达水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）特异性抗原N蛋白，进而纯化并分析其免疫原性。根据GenBank中已发表的VSV基因组N基因序列，分别合成VSV两种不同血清型的N基因，经序列对比分析后，设计合成1对特异性引物，PCR扩增获得约1 300 bp的N基因片段，将目的片段亚克隆至pCold Ⅰ原核表达载体中，经IPTG诱导表达后，采用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化重组N蛋白。SDS-PAGE分析表明，N基因在大肠杆菌中得到表达，蛋白大小约为50 ku；Western blotting检测结果表明，该重组蛋白与VSV多克隆抗体发生特异性反应。本试验成功构建了VSV-IND和VSV-NJ的原核表达载体，实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达，纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：水泡性口炎病毒(VSV);N蛋白;原核表达

基金资助：十二五国家科技支撑计划"外来与新发动物疫病筛查与鉴定技术研究与示范"（2013BAD12B01）