GDF9慢病毒载体的构建及其在山羊原代成纤维细胞中的稳定表达

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第9期北京时间：

作者：滑留帅, 王璟, 陈付英, 辛晓玲, 楚秋霞, 冯亚杰, 徐照学, 王二耀

单位：河南省农业科学院畜牧兽医研究所, 河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室, 郑州 450002

摘要：试验旨在构建山羊生长分化因子9（growth differentiation factor 9，GDF9）慢病毒载体，并使其在山羊原代成纤维细胞中稳定表达。利用全基因合成法克隆了绵羊GDF9基因的CDS全长片段，长约1 362 bp，编码453个氨基酸。利用双酶切和连接，将GDF9基因片段亚克隆至慢病毒载体中，构建了过表达GDF9的慢病毒载体。将慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞后，获得了滴度为1×106 TU/mL的慢病毒。利用制备的GDF9慢病毒感染山羊原代成纤维细胞后，观察荧光表明，60%以上的细胞能够观察到红色荧光，说明制备的慢病毒对山羊原代成纤维细胞具有较高的感染效率。经过嘌呤霉素筛选后，所有的细胞均能观察到红色荧光。实时荧光定量PCR分析表明，制备的细胞系中GDF9表达水平比对照组高12.17倍，说明成功获得了稳定表达GDF9的山羊成纤维细胞系。本试验结果为进一步研究GDF9基因的生物学功能，以及山羊未来的种质资源创新奠定基础。

关键词：GDF9基因')">GDF9基因;慢病毒;山羊;原代成纤维细胞

基金资助：转基因生物新品种培育子课题——优质转基因（fat-1）肉山羊新品种培育（2014ZX08008003-007）；家畜"卵泡波"对外源激素的响应机制研究（162102110035）；羊促卵泡素（FSH）敏感性的分子调控机制研究（2016YQ18）