拉沙里菌素单克隆抗体的研制及间接竞争ELISA检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第10期北京时间：

作者：杨小康, 张绘艳, 顾建红, 袁燕, 卞建春, 刘宗平, 刘学忠

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：为制备拉沙里菌素（LAS）单克隆抗体，建立针对LAS的间接竞争ELISA（Ci-ELISA）方法，试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原，6次免疫后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定，C11的抗体类型为IgG1，轻链为κ链；所制腹水效价为1∶16 000，与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示，Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x－0.2374（R2=0.9914），LAS在5~1 000 ng/mL时，线性关系良好，IC50为90.22 ng/mL，加标回收率为81.76%~102.41%，表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。

关键词：拉沙里菌素;半抗原;单克隆抗体;间接竞争ELISA

基金资助：牛羊碳水化合物、蛋白质与能量代谢失衡防控技术研究（2016YFD0501206）