H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第10期北京时间：

作者：王博, 王慧煜, 赵宝华, 罗静, 王承民, 何宏轩, 韩雪清

单位：1. 中国检验检疫科学研究院, 北京 100029;2. 中国科学院动物研究所, 北京 100101;3. 河北师范大学, 石家庄 050024

摘要：为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus，SIV）的方法，根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin，HA）基因保守序列，分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针，建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示，该方法敏感性高，可检测到最低拷贝数为102拷贝/μL；重复性良好，重复孔Ct值的变异系数均在5%以下；特异性好，除H1和H3亚型SIV外，H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性；在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV，检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异，可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。

关键词：H1和H3亚型猪流感病毒(SIV);双重实时荧光定量RT-PCR;TaqMan探针

基金资助：十二五国家科技支撑计划课题（2013BAD12B01）；国家林业局野生动物疫源疫病监测项目；中国科学院战略生物资源科技支撑体系运行专项野生动物疫源疫病样品组织库（CZBZX-1）