小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第11期北京时间：

作者：薛忠, 董淑红, 王善辉

单位：徐州生物工程职业技术学院动物工程系, 徐州 221006

摘要：试验旨在探索利用杆状病毒表达系统分泌表达小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV） F基因蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PPRV F基因克隆到已插入蜂毒信号肽（melittin）的转移载体pFastBacⅠ中，将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，经抗性及蓝白斑筛选得到含F基因的重组杆状病毒DNA （F-Bacmid），转染提取的F-Bacmid DNA至Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒（F-rBac），应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化。SDS-PAGE结果表明，重组蛋白在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达，并可产生较高浓度的重组蛋白；Western blotting结果显示，重组蛋白可被PPRV的特异性抗体所识别，表明重组蛋白具有反应原性；应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠试验结果显示，该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究成功分泌表达了PPRV F蛋白，该蛋白能够刺激机体产生免疫应答，为小反刍兽疫亚单位疫苗的研制奠定基础。

关键词：PPRVF蛋白;杆状病毒;分泌表达;免疫原性;保护效果

基金资助：徐州市科技项目（KC14N0070）