猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第11期北京时间：

作者：张海洁, 谢华杰, 江礼捷, 连俊伟, 刘敏, 闵天奇, 王志强

单位：1. 扬州大学兽医学院, 兽医药理毒理研究室, 扬州 225009;2. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：试验旨在构建猪β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic receptor，β2AR）基因及其突变体真核表达载体，并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β2AR基因，利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1（+），构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-β2AR，加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1（+）-β2AR。以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1（+）-β2AR-D130N、myc-pcDNA3.1（+）-β2AR-C285S和myc-pcDNA3.1（+）-β2AR-D130N/C285S，并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞，利用Western blotting技术验证其表达。结果显示，猪β2AR基因已正确重组入pcDNA3.1（+）载体中；经测序鉴定，猪β2AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺，第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸。Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。本研究成功构建了猪β2AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体，并验证其在HEK293T细胞中正常表达，为进一步研究猪β2AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础。

关键词：猪;β2AR基因')">2AR基因;真核表达载体;突变体;Westernblotting

基金资助：江苏高校优势学科建设工程项目（PAPD）