含有分子内佐剂的CIC蛋白表达及免疫活性初步研究

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第12期北京时间：

作者：张少铎, 来怡君, 姜辉, 程欣然, 叶玉婷, 何溪雨, 徐乐, 宋佰芬, 于立权, 崔玉东, 马金柱

单位：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院, 大庆 163319

摘要：为了研究含有分子内佐剂的CTB-IsdBid-Clfais（CIC）蛋白表达及其免疫活性，试验采用重叠PCR方法将分子内佐剂CTB与IsdBid-Clfais基因串联，并将CTB-IsdBid-Clfais（CIC）插入到表达载体pET-32a（+）中，构建pET-32a（+）-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒，将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达目的蛋白CIC，利用Western blotting方法对其进行鉴定，并以ELISA方法检测CIC蛋白的免疫活性。结果发现，试验成功扩增了2 072 bp的目的基因CIC，并将CIC正确连接到pET-32a（+）载体上，构建了pET-32a（+）-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒；Western blotting结果证实，该重组质粒能够在大肠杆菌BL21感受态细胞中正确表达CIC蛋白，分子质量大小为95.9 ku；ELISA结果显示，CIC试验组与IsdBid、Clfais蛋白组间均无显著差异（P>0.05），与BSA组间差异极显著（P<0.01）。综上所述，本研究成功构建了pET-32a（+）-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒，该质粒在大肠杆菌BL21中成功表达了CIC蛋白，且CIC能与IsdBid、Clfais免疫小鼠血清发生反应，具有较强的免疫活性。

关键词：金黄色葡萄球菌;CTB-IsdBid-Clfais蛋白;蛋白表达;免疫原性

基金资助：黑龙江省大学生创新创业训练计划项目（201510223001）；黑龙江省自然科学基金项目（C201443）；大庆市指导性科技计划项目（S2dfy-2015-44）