空肠弯曲菌PEB1A蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2017年第12期北京时间：

作者：王莉, 沙洲, 李诗语, 梁佳茗, 王兴龙

单位：1. 吉林农业大学动物科技学院, 长春 130118;2. 军事医学科学院军事兽医研究所, 长春 130122;3. 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室, 长春 130122

摘要：为了建立检测血清中空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）抗体的间接ELISA方法，试验通过PCR扩增并克隆空肠弯曲菌PEB1A基因，构建原核表达载体pET32a-PEB1A，将该表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，诱导表达获得约47 ku的可溶性目的蛋白，通过Western blotting证明所表达的重组蛋白具有良好的生物学活性。以纯化后的重组蛋白作为包被抗原，建立空肠弯曲菌抗体间接ELISA方法，对其特异性、敏感性、重复性进行检测。结果表明，本试验建立的空肠弯曲菌抗体间接ELISA检测方法临界值为0.3424，本方法仅与空肠弯曲菌阳性血清发生特异性反应，与其他抗血清无交叉反应，具有较强的特异性，批内、批间的重复性试验变异系数均<5%，具有较好的重复性和稳定性。该方法的建立可应用于血清中空肠弯曲菌抗体的快速检测，为进一步防制空肠弯曲菌腹泻提供依据。

关键词：空肠弯曲菌;间接ELISA;黏附蛋白PEB1A;原核表达

基金资助：国家重点研发项目"宠物疾病诊疗与防控新技术"（2016YFD0501004）