抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第1期北京时间：

作者：潘思尧, 张丹丹, 刘权辉, 王国栋, 吕丹薇, 黄奔

单位：1. 广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁 530004;2. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530004;3. 广西医学科学院, 南宁 530016

摘要：【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞（chemical induced mammary epithelial cells，CiMECs）体外泌乳功能的调节作用，旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及"培养皿奶"的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞（GEFs）为研究材料，经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂（RepSox）诱导8 d后，分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物（miR-142-3p inhibitor）及抑制物对照（inhibitor-NC），不转染的细胞作为空白对照（BC），转染24 h后，采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平，CCK-8法检测细胞的增殖率，Western blotting检测β-酪蛋白（β-casein）的表达量，甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集；免疫荧光染色结果显示，诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞（MECs）的特异性标记物细胞角蛋白14（CK14）和CK18；油红O染色结果显示，诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴，表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示，与空白对照组相比，miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低（P0.05）；miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加（P0.05）。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs，抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量，从而影响泌乳功能。

关键词：奶山羊;乳腺上皮细胞(MECs);miR-142-3p

基金资助：国家自然科学基金（31960160）