地锦草水提物在IPEC-J2细胞中的抗炎与抗氧化作用

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第2期北京时间：

作者：陈瑾, 谢景昊, 韩莹倩, 杨彦宾, 王月影, 李和平

单位：1. 河南农业大学, 农业农村部动物生化与营养重点实验室, 郑州 450046;2. 河南省动物生长发育调控重点实验室, 郑州 450046

摘要：【目的】为了揭示地锦草(EH)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物(0、5、10、50、125、200 μg/mL)处理IPEC-J2 细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力,确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组(CT)、脂多糖(LPS)组(LPS)、EH+LPS组(ELP),每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理,LPS组细胞用5 μg/mL LPS处理,ELP组细胞用5 μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理,各组细胞均处理12 h后,收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达;ELISA法检测上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,化学荧光法检测上清液中活性氧(ROS)水平。【结果】与0 μg/mL EH组相比,5、50 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力显著增加(P＜0.05);10 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著增加(P＜0.01),125 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力下降,但差异不显著(P＞0.05),200 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著下降(P＜0.01)。因此,后续选用10 μg/mL EH处理IPEC-J2细胞。与CT组相比,LPS组IPEC-J2细胞中IL-6、TNF-α基因mRNA的表达极显著增加(P＜0.01),上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度极显著增加(P＜0.01),Keap1、Nrf2和HO-1基因mRNA表达极显著下降(P＜0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量极显著下降(P＜0.01)。与LPS组相比,ELP组IPEC-J2细胞中IL-6基因mRNA表达极显著下降(P＜0.01),TNF-α基因mRNA的表达显著下降(P＜0.05),细胞上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度均极显著下降(P＜0.01),Keap1、Nrf2、HO-1基因mRNA表达极显著增加(P＜0.01),GSH-Px含量极显著升高(P＜0.01),SOD含量显著升高(P＜0.05)。【结论】EH水提物在猪小肠上皮细胞中通过激活Keap1/Nrf2信号,提高抗氧化酶SOD和GSH-Px含量,启动下游靶基因HO-1表达,发挥抗炎和抗氧化的作用,且10 μg/mL EH水提物作用效果最佳。

关键词：地锦草水提物;IPEC-J2细胞;LPS;氧化应激;Keap1/Nrf2信号

基金资助：河南省科技攻关计划(212102110356、222102110402)