胎牛血清在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用研究

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第2期北京时间：

作者：相德才, 李水英, 张斌, 张彦, 梁家充, 吕春荣, 洪琼花, 权国波, 吴国权

单位：1. 云南省畜牧兽医科学院, 国家区域性(云南)畜禽遗传资源基因库, 昆明 650224;2. 红河州红河县农业农村和科学技术局, 红河哈尼族彝族自治州 654499

摘要：【目的】研究胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用。【方法】本试验以体外培养第5天的猪孤雌激活囊胚为材料,将新鲜和冷冻囊胚分别在含10% FBS(V/V)的胚胎培养液中继续培养48 h,即分为新鲜组(Fresh)、新鲜+FBS组(Fresh+FBS)、冷冻组(Vitrified)、冷冻+FBS组(Vitrified+FBS)。观察各组囊胚的扩张和孵化能力,检测胚胎的细胞膜损伤、凋亡细胞数目、总细胞数目、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体活性以及发育相关基因的表达水平。【结果】与Fresh和Vitrified组相比,Fresh+FBS和Vitrified+FBS组的完全扩张率、孵化率和囊胚细胞总数均显著提高(P＜0.05),细胞膜损伤率和细胞凋亡率均显著降低(P＜0.05)。与Fresh组相比,Vitrified组ROS水平显著升高(P<0.05),Fresh+FBS和Vitrified+FBS组ROS水平均显著降低(P<0.05)。Vitrified+FBS组的线粒体活性显著高于Vitrified组(P<0.05)、显著低于Fresh+FBS组(P<0.05),与Fresh组无显著差异(P＞0.05)。相比于Fresh组,Vitrified组POU结构域与类转录因子1(POU5F1)表达水平显著上升(P＜0.05)、过氧化氢酶(CAT)表达水平显著下降(P＜0.05)。增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、BCL2相关X蛋白(BAX)/BCL2L1的表达水平在Fresh和Vitrified组之间均无显著性差异(P＞0.05)。Fresh+FBS和Vitrified+FBS组中PCNA、SOD1和CAT的表达水平显著高于Fresh和Vitrified组(P<0.05)。【结论】体外培养第5天的新鲜和冷冻猪孤雌囊胚在10% FBS中继续培养,其发育能力及胚胎质量均得到明显改善。

关键词：猪;囊胚;玻璃化冷冻;胎牛血清;胚胎质量

基金资助：云南省基础研究计划重点项目(202001AS070001);云南省科技人才与平台计划(202005AC160004);国家自然科学基金(32260837、31960663)