高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第5期北京时间：

作者：王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊

单位：安阳工学院, 河南省兽用生物制品研究与应用国际联合实验室, 安阳 455000

摘要：【目的】原核表达禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)Hexon蛋白,并制备兔抗Hexon多克隆抗体,为FAdV-4 Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成(PCR-based accurate synthesis,PSA)方法,设计全长拼接引物,在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因;利用同源重组技术将其连接至pCzn1-Hexon表达载体,获得pCzn1-Hexon重组质粒进行原核表达,采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗Hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-Hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确;获得的重组蛋白以包涵体的形式表达,分子质量约为41 ku;用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后,通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512 000。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting和IFA检测到鸡肝癌细胞(LMH)中的Hexon蛋白表达,表明制备的多克隆抗体能与Hexon蛋白发生特异性反应。【结论】FAdV-4 Hexon蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,制备并纯化的抗Hexon多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,该研究为进一步探究Hexon蛋白的生物学功能及其在FAdV-4感染和致病过程中的作用奠定了基础。

关键词：禽腺病毒4型;Hexon蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金资助项目(NSFC32002313);河南省高等学校重点科研项目(20B230001)