猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第5期北京时间：

作者：卓娜, 朱忠武, 李静, 胡世享, 王建昌, 林华, 陈朝林, 韩佃刚, 艾军, 陈培富

单位：1. 云南农业大学, 昆明 651000;2. 云南昆明海关技术中心, 昆明 651000;3. 湖南长沙海关技术中心, 长沙 410000;4. 河北石家庄海关技术中心, 石家庄 050000;5. 四川成都海关技术中心, 成都 610000

摘要：【目的】分析猪源戊型肝炎病毒(Swine hepatitis E virus,sHEV)4型ORF2蛋白的结构和功能,筛选具有保护性抗原的基因片段并表达蛋白,为研究其作为潜在保护性抗原提供候选蛋白。【方法】对sHEV 4型ORF2蛋白进行生物信息学分析,选取具有潜在保护性抗原蛋白的基因片段ORF2(128/140),通过PCR扩增、酶切后克隆至昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞,通过Western blotting鉴定分析表达蛋白p128/p140。【结果】生物信息学分析显示,sHEV 4型ORF2蛋白存在2个稳定蛋白:p128和p140,分别含有496和476个氨基酸,二者皆为稳定蛋白,无跨膜区,蛋白二级结构主要以无规则卷曲为主。p128蛋白有11个T细胞表位、21个B细胞表位;p140蛋白有14个T细胞表位、18个B细胞表位。成功构建ORF2(128)、ORF2(140)2个基因的昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞后经Western blotting检测发现,表达蛋白可被His标签单抗、sHEV抗体阳性血清识别。【结论】试验发现2个sHEV具有潜在保护性抗原的p128和p140蛋白,均可在sf9细胞中表达,且具有免疫活性。结果为进一步研究sHEV ORF2蛋白的功能和新型疫苗的研发提供了材料。

关键词：猪戊型肝炎病毒(sHEV);ORF2蛋白;生物信息学分析;昆虫细胞;表达

基金资助：国家重点研发计划课题(2022YFC2601605);云南省技术创新人才(2016HB018);云南省院士工作站