猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第6期北京时间：

作者：欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰

单位：1. 开江县动物疫病预防控制中心, 达州 636250;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046;3. 河北科技师范学院, 河北省预防兽医学重点实验室, 秦皇岛 066004

摘要：【目的】原核截短表达猪细小病毒6型（Porcine parvovirus type 6，PPV6）ORF2基因，并制备PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白多克隆抗体，为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板，PCR扩增获得ORF2截短基因片段，将其克隆至原核表达载体pET30a （+）中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达，Ni-NTA树脂亲和层析纯化，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化，免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，采用Western blotting、间接免疫荧光试验（IFA）和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体，原核截短表达了PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白；SDS-PAGE结果显示，重组PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白大小约为40 ku，主要以包涵体形式存在；Western blotting结果显示，该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合，具有良好的反应原性；Western blotting间接与ELISA结果显示，纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应，抗体效价为1：25 600；IFA鉴定结果表明，PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF2基因并制备了兔抗PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白多克隆抗体，为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。

关键词：猪细小病毒6型(PPV6);ORF2基因')">ORF2基因;截短表达;多克隆抗体

基金资助：四川省科技计划资助项目（2023JDRC0126）；达州市科技计划资助项目（22CYRC0016）