鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第6期北京时间：

作者：焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟

单位：1. 南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室, 南京 210095;2. 江苏农牧科技职业学院, 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心, 泰州 225300

摘要：【目的】本研究选择原核表达系统表达鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）核衣壳蛋白（Capsid protein），并制备其多克隆抗体，为DTMUV分子机制研究奠定基础。【方法】根据DTMUV-201909株基因序列，运用一步克隆技术将Capsid基因克隆至表达载体pET-30a （+）中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，利用IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白；使用ISA206佐剂与纯化后的重组蛋白混合乳化后免疫BALB/c小鼠，以获得多克隆抗体。间接ELISA方法测定获得的多克隆抗体效价，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）验证。【结果】试验成功构建pET-30a-Capsid重组质粒，SDS-PAGE结果显示，表达的重组蛋白大小约为18 ku，主要以包涵体形式存在；Western blotting结果表明，该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应，具有良好反应原性。间接ELISA结果显示，制备的鼠抗Capisd蛋白多克隆抗体效价可达1：256 000；Western blotting和IFA结果显示，制备的多克隆抗体能特异性识别DTMUV感染细胞样品的Capsid蛋白。【结论】本研究成功制备小鼠抗Capsid蛋白多克隆抗体，为深入研究DTMUV Capsid蛋白的结构和功能提供了试验材料，为进一步阐明DTMUV的致病机制奠定基础。

关键词：鸭坦布苏病毒(DTMUV);核衣壳蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：江苏省高等学校自然科学研究面上项目（22KJB230005）；"凤城英才"青年科技人才托举工程项目（泰科协发[2021]45号）；江苏农牧科技职业学院校级科研课题（NSF2021CB05）；江苏省大学生创新创业训练计划项目（202112806011Y）