LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2023年第6期北京时间：

作者：钟粤韵, 杨舒展, 陈非玥, 陆智儿, 李冰心, 李婉雁, 田允波, 黄运茂, 许丹宁, 曹楠

单位：1. 仲恺农业工程学院动物科技学院, 广州 510225;2. 广东省水禽健康养殖重点实验室, 广州 510225;3. 广州海关技术中心, 广州 510623

摘要：【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术，探索脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制，为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚，无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化，过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度（0（对照组）、0.1、1.0、10 μg/mL） LPS，分别于12、24、36 h收集细胞，采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧（ROS）水平，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因（caspase3、caspase9、p38） mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养，鹅胚肝细胞形态完整，贴壁率高，存活率高，能稳定生长。PAS染色结果显示，鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色，肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现，鹅胚肝细胞有氧化损伤情况，其中1.0 μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制，除36 h外，细胞凋亡关键基因caspase3、caspase9、p38表达量均显著降低（P<0.05）。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法，添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高，激活p38/MAPK通路，且细胞凋亡受到一定抑制。

关键词：鹅胚肝细胞;脂多糖(LPS);ROS/p38/MAPK信号通路;细胞凋亡

基金资助：广东省自然科学基金面上项目（20220501605）；湖南省自然科学基金面上项目（2021JJ30312）